ISSN 2500-2236
DOI-prefix: 10.18527/2500-2236
КРАТКОЕ СООБЩЕНИЕ

Эффективная экспрессия и очистка нуклеопротеинов вирусов гриппа A и B в E. coli

Аннотация


Нуклеопротеин – белок вируса гриппа, играющий важную роль на всех этапах его существования. Нуклеопротеин обеспечивает организацию генома вируса и его ядерно-цитоплазматический транспорт в качестве структурного компонента вириона, а также участвует в транскрипции и репликации вирусной РНК. Для исследователей нуклеопротеин представляет интерес как объект для разработки вакцин и методов диагностики гриппа. В связи с вовлечением в процессы репликации вируса он также является потенциальной мишенью для противовирусной терапии. Ранее сообщалось об успешной экспрессии кодон-оптимизированных генов нуклеопротеина вируса гриппа в Ecoli и клетках насекомых Sf9. В данной статье мы продемонстрировали эффективную экспрессию рекомбинантных нуклеопротеинов вирусов гриппа A и B в растворимой форме без оптимизации кодонов последовательностей ДНК. Данная процедура позволяет сохранить котрансляционный фолдинг, конфигурацию и функцию белка. Полученные нуклеопротеины вирусов гриппа A и B были мономерами и хорошо реагировали со специфическими антителами мыши по данным вестерн-блоттинга. Наши результаты показывают, что функциональные рекомбинантные нуклеопротеины гриппа A и B могут быть получены в EColi без оптимизации кодонов, белки экспрессируются в растворимой форме в виде мономера и имеют специфическую иммунную реактивность.

Abstract


Viral nucleoprotein (NP) is an abundant essential protein of an influenza virus that has important functional and structural roles. It participates in genomic organization, nuclear trafficking, RNA transcription, and genome replication. From the research point of view, NP is an important protein that is used in the development of new diagnostic methods and vaccination protocols. NP is a promising target for antiviral chemotherapeutic drugs as well. Successful expression of codon-optimized NP genes in E. coli has been reported. In this study, we demonstrated the efficient expression and purification of soluble NPs of influenza A and B viruses in E. coli without the codon-optimization of DNA sequences. This procedure preserves the co-translational protein folding, protein configuration and function. Obtained NPs of influenza A and B viruses were monomers and reacted well with mouse specific antibodies according to Western blot analysis. Our results show that both influenza A and influenza B virus NPs can be efficiently expressed in E. coli without codon-optimization.

 

Статья существует только на английском языке, чтобы прочитать ее, пройдите по ссылке

Читать эту статью на английском